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BIBLIOTECA DO INSTITUTO DE QUÍMICA
UNICAMP

 
DISSERTAÇÃO DE MESTRADO
 
Autora: Buzatto, Adriana Zardini
Título: Análise de nucleosídeos, potenciais biomarcadores tumorais de câncer de próstata, por eletroforese capilar
Ano: 2014
Orientadora: Profa. Dra. Ana ValériaColnaghi Simionato Cantú
Departamento: Química Analítica
Palavras-chave: Câncer, Nucleosídeos, Biomarcadores tumorais, Eletroforese capilar, Próstata - Câncer
Resumo: O câncer está entre as maiores causas de óbitos no mundo, porém, se a enfermidade for detectada no início, grande parte dos casos pode atingir a cura. Os nucleosídeos são moléculas originadas da degradação do RNA e suas concentrações em fluidos biológicos são alteradas na presença de tumores devido à maior taxa de replicação celular, portanto são potenciais biomarcadores tumorais. A investigação do perfil de tais metabólitos pode auxiliar no diagnóstico e no tratamento do câncer. Neste trabalho, um novo método para a análise de nucleosídeos em soro sanguíneo por eletroforese capilar (CE-UV) no modo cromatografia micelar eletrocinética capilar (MECK) foi desenvolvido e validado. O tensoativo catiônico brometo de cetiltrimetilamônio (CTAB) foi empregado, com consequente inversão do fluxo eletrosmótico (EOF). Os analitos foram extraídos da matriz de soro sanguíneo através de extração em fase sólida (SPE) e um amplo estudo sobre estratégias de pré-concentração foi realizado para obtenção de limites de quantificação mais adequados. Sete padrões de nucleosídeos foram separados em c.a. 25 min sob as condições de análise otimizadas, i.e. eletrólito de corrida composto por ácido bórico 30 mmol/L, CTAB 50 mmol/L e metanol 10% (v/v) em pH 9,90; tensão de -10 kV; temperatura de 20°C; injeção hidrodinâmica a 50 mbar por 120 s seguida por aplicação 25 kV entre vials de eletrólito por 15 s; detecção em 260 nm; e capilar de sílica fundida com 50 mm de diâmetro interno e 56 cm de comprimento efetivo. Foram atingidas eficiências entre 4,3 × 104 e 1,0 × 105 e resolução mínima de 1,5. A metodologia foi validada em um pool de soro sanguíneo de indivíduos sadios e foram obtidos limites de quantificação entre 1,0 e 4,0 mmol/L, coeficientes de correlação linear (R) entre 0,9801 e 0,9969 e precisões e exatidões com desvios menores que 20%. O método foi aplicado a amostras de 60 indivíduos sadios e 66 portadores de câncer de próstata e um estudo quimiométrico foi realizado para avaliação da potencialidade dos nucleosídeos como biomarcadores tumorais, com obtenção de sensibilidade acima de 90%. Tal metodologia, portanto, pode ser empregada em conjunto com as já bem estabelecidas para o diagnóstico do câncer de próstata.
Abstract: Cancer is amongst the major causes of death worldwide, but, if the disease is detected early, most cases can be cured. Nucleosides are molecules originated from RNA degradation and their concentrations in biological fluids are altered during tumor development due to a higher rate of cell replication; therefore, they are putative tumor biomarkers. The investigation of the profile of such metabolites may aid in the diagnosis and treatment of cancer. In this work, a novel method for the analysis of nucleosides in blood serum by capillary electrophoresis (CE-UV) under micellar electrokinetic capillary chromatography (MECK) mode was developed and validated. The cationic surfactant cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) was employed, with consequent reversal of the electrosmotic flow (EOF). The analytes were extracted from blood serum samples by solid phase extraction (SPE) and a wide study on pre-concentration strategies was accomplished in order to obtain more adequate limits of quantification. Seven nucleoside standards were separated within c.a. 25 min under the optimized conditions, i.e. electrolyte composed by 30 mmol/L boric acid, 50 mmol/L CTAB and 10% methanol (v/v) with pH 9.90; voltage of -10 kV; temperature of 20°C; hydrodynamic injection under 50 mbar for 120 s followed by 25 kV for 15 s between electrolyte vials; detection in 260 nm; and fused silica capillary with 50 mm internal diameter and 56 cm of effective length. Efficiencies between 4.3 × 104 and 1.0 × 105 and a minimum resolution of 1.5 were achieved. The methodology was validated in a pool of blood serum samples from healthy individuals and limits of quantification between 1.0 and 4.0 mmol/L were obtained, as well as linear correlation coefficients between 0.9801 and 0.9969 and precision and accuracy with deviations lower than 20%. The method was applied to samples from 60 healthy individuals and 66 prostate cancer patients and a chemometric study was employed in order to evaluate the potentiality of the nucleosides as tumor biomarkers, with sensibility higher than 90%. Therefore, this methodology may be applied in conjunction with those already established for prostate cancer diagnosis.
Arquivo (Texto Completo): 000925710.pdf ( tamanho: 6,0 MB )

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