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BIBLIOTECA DO INSTITUTO DE QUÍMICA
UNICAMP

 
TESE DE DOUTORADO
 
Autora: Costa, Maria Célia Pires
Título: Centrifugação e Osmocentrifugação em Gradientes de Densidade: Aplicação ao Fracionamento e Caracterização de Partículas e Formação de uma Nova Classe de Estruturas Dissipativas
Ano: 1989
Orientador: Prof. Dr. Fernando Galembeck
Departamento: Físico-Química
Palavras-chave: -
Resumo: Esta tese compreende quatro partes. 1. Descrição de uma nova metodologia para o fracionamento e determinação do diâmetro de partículas esféricas, que foi verificada usando-se látex de PS. Zonas de mistura de látexes poliméricos, na faixa de 0,1-0,5 mm, são colocadas sobre gradientes de densidade e centrifugadas, obtendo-se a separação de bandas de látex, das quais o polímero pode ser coletado e analisado posteriormente. As velocidades de migração das bandas nos experimentos de osmocentrifugação zonal são mais rápidas que em centrifugação zonal. 2. Estudo da agregação de partículas de látex de PS. O sobrenadante de um látex (0, 109 mm) coagulado irreversivelmente foj tracionado em seis bandas correspondentes a singletes, dubletes, até hexapletes. Usando um outro látex (0,460 mm) em diferentes concentrações de NaCl (abaixo e acima da concentração crítica de coagulação), a centrifugação zonal do látex revelou várias bandas, mesmo a [NaCl]=5 x 10 M. Esta técnica permite verificar a existência de espécies agregadas de látex e sua dependência com a concentração de eletrólito e tempo de coagulação. 3. Determinação do coeficiente de sedimentacão da eritrocruorina de Glossoscolex paulistus, uma hemoglobina gigante extracelular de anelídeo utilizando a metodologia desenvolvida na primeira parte da tese. Sobre o gradiente de densidade foram aplicadas amostras da proteína (50 ml cada; concentrações 2,5; 5,0; 6,25 e 12,5 mg/ml), centrifugadas a 4000 rpm, 4°C por 48 h. Foi obtido s20,w=58 S, que corresponde (para eritrocruorina) à massa molar de 323 x 10 Daltons. 4. Formação de estruturas dissipa - tivas em células dediálise. Em experimentos de osmocentrifugação zonal com amostras de alta concentração de eritrocruarina (125 mg,ml) hemoglobina, humana (92,4 mg/ml) é observada a formação de múltiplas bandas (estriamento) em toda a célula de diálise gerando um padrão periódico de concentração. É proposto um modelo para essas estruturas, baseado na formação de gradientes de concentração, nas bandas, seguido de convecção.
Abstract: This thesis has four parts: 1. Description of a new methodology for the fractionation and determination of poly- (styrene) latex particles diameters. Mixed polymer latex zones in the 0.1 - 0.5 mm diameter range were layered over density gradients and centrifuged. Separate latex bands were obtai-ned, from which polymer may be collectcd and further analysed. The movement of the sedimenting latex, zones is faster in osmocentrifugation than in normal sedimentation experiments. 2. Study of poly(styrene) latex particles aggregation. The supernatant of a (nominal) 0.109 mm latex, which coagulated accidentally, was fractionated in size bands corresponded to singlets, dublets up to hexaplets. Using another latex, to which NaCl was added to give various salt concentrations (above and below the critical coagulation concentration), latex zonal centrifugation revelead various bands, even at [NaCl]=5 x 10 M. This demonstrates the existence of the aggregate species and their dependence on eletrolyte concentration and coagulation time. 3. The determination of the sedimentation coefficient of erythrocruorin from Glossoscolex paulistus, a extracellular giant hemoglobin by low-speed zonal centrifugation. Erythrocruorin solutions (50 ml: concentrations, 2.5, 5.0, 6.25 and 12.5 mg/ml) were layered on top of the density gradients and centrifuged at 4000 rpm, 4°C: The value obtained, s20,w = 58 S, corresponds to a MW of 3.110 x Daltons. 4. A study on the formation of dissipative structures in zonal osmocentrifugation. In experiments of zonal centrifugation of concentrated erythricruorin (125 mg/ml) and human hemoglobin (92.4 mg/ml), many bands, are formed throughout the dialysis cell, producing a periodic concentration pattern. A model for the formation of these structures is proposed, based on formation of concentration gradients in the sedimenting zone, followed by convection.
Arquivo (Texto Completo): vtls000047025.pdf ( tamanho: 6,22MB )

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