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BIBLIOTECA DO INSTITUTO DE QUÍMICA
UNICAMP

 
TESE DE DOUTORADO
 
Aguardando Data da Autorização para Disponibilizar o Arquivo com Texto Completo
Autor: Angolini, Célio Fernando Figueiredo
Título: Análise de Especiação de Metais e Metalóides Ligados a Anidrase Carbônica Empregando TWIMS-MS e ICP-MS
Ano: 2014
Orientador: Prof. Dr. Marco Aurélio Zezzi Arruda
Co-orientador: Prof. Dr. Fábio Cesar Gozzo
Departamento: Química Analítica
Palavras-chave: Especiação Química, Mobilidade iônica, ICP-MS
Resumo: No Capítulo 1, é proposta a técnica de mobilidade iônica na modalidade TWIMS, acoplada a espectrômetro de massas do tipo ESI-Q-ToF MS/MS para análise de especiação da anidrase carbônica ligada a Ba2+, Zn2+, Cu+, Cu2+, Pb2+, Pb4+, Se4+ e Se6+. O método é aplicado com sucesso na separação de espécies com diferentes estados de oxidação, mesmo quando as espécies de Se4+ e Se6+ são adicionadas em uma mistura com a anidrase carbônica. O método também é aplicado para avaliação do estado de enovelamento da anidrase carbônica, em condições nativas e desnaturadas, sendo considerado satisfatório na elucidação das diferentes conformações da proteína. No Capítulo 2, a técnica de ICP-MS é usada na análise de especiação isotópica de Zn ligado à anidrase. A exatidão da medidas aproximou-se das condições naturais osbervadas para a razão isotópica de Zn ao final das otimizações. A precisão obtida situa-se dentro da margem observada para analisadores de m/z do tipo quadrupolo. Os principais desafios enfretados neste capítulo foram minimizar os efeitos de discriminação de massas e a remoção de interferências poliatômicas. A enzima foi enriquecida com os isótopos Zn e Zn, sendo observada maior razão isotópica para anidrase ligada Zn. A atividade da anidrase enriquecida com isótopos de Zn apresentou resultados estatisticamente semelhantes.
Abstract: In Chapter 1, ion mobility in the TWIMS mode is proposed, coupled to a ESI-Q-ToF MS/MS mass spectrometer for speciation analysis of carbonic anhydrase bound to Ba2+, Zn2+, Cu+, Cu2+, Pb2+, Pb4+, Se4+ and Se6+. The method is successfully applied to separations of selenium species with different oxidations states, even when the species Se4+ and Se6+ are incubated in a mixture with carbonic anhydrase folding state in native and denatures conditions, and it is considered as satisfactory in the elucidation of different conformations of the protein. In Chapter 2, an ICP-MS is used for the isotopic speciation analysis of Zn bound to anhydrase. The accuracy measurements are closer to natural conditions for Zn isotope ratio, in the end of the optimization. The precision is within the range observed for m/z analyzer such as quadrupole. The main challenges in this chapter arte to minimize the effects of mass discrimination and the removal of polyatomic interferences. The enzyme is enriched with Zn and Zn isotopes, and the highest isotope ratio is observed for Zn bound to anhydrase. Anhydrase activity of Zn enriched isotopes yield similar statistical results.
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