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BIBLIOTECA DO INSTITUTO DE QUÍMICA
UNICAMP

 
TESE DE DOUTORADO
 
Autora: Basilio, Carmelita Aparecida
Título: Extração, Purificação, Imobilização, Estudo Cinético e Calorimétrico das Enzimas Proteolíticas Presentes no Látex do Mamoeiro
Ano: 1994
Orientador: Prof. Dr. Pedro Luiz Onófrio Volpe
Departamento: Físico-Química
Palavras-chave: -
Resumo: As enzimas papaína, quimopapaína B e papaya proteinase foram extraidas e purificadas a partir do látex seco de Carica papaya. O método desenvolvido neste trabalho para a purificação das enzimas proteolíticas mostrou ser possível a separação das mesmas em um único passo, utilizando gradiente de força iônica crescente com tampão acetato de sódio pH 5,0. As proteases livres e imobilizadas foram utilizadas para estudos cinéticos e calorimétricos utilizando substratos sintéticos e proteicos. A imobilização em sílica funcionalizada mostrou ser muito eficiênte mantendo a atividade enzimática por vários meses. Papaína e quimopapaína B apresentaram maior afinidade pelos substratos proteicos do que a papaya proteinase. Para as enzimas imobilizadas papaína apresentou maior afinidade pelo substrato do que as outras proteases. Estudos calorimétricos mostraram que as enzimas quimopapaína B e papaya proteinase são termicamente reversíveis e que a desnaturação destas enzimas obedece um modelo de transição de dois estados. Confirmou-se a existência de estados intermediários de desnaturação para a papaína. Foram determinados os valores da entaIpia de desnaturação,DHDESN, para as proteases, assim como a razão DHvanTHoff/DHDENS. Apesar das enzimas terem uma estrutura primária muito sementante a variacão de entalpia de proteólise DH PROT é muito diferente.
Abstract: The enzymes papain, chymopapain and papaya proteinase were extracted and purified from died latex of Carica papaya. The method developed in this work for the purification of the proteolytic enzymes has shown to allow the separation of the enzymes in only one step by using increasing gradient concentration of the buffer. The immobilized and dissolved enzyme were used for kinetics and calorimetric studies with synthetic and proteic substrates. Immobilization on glass spheres has shown to be very efficient keeping the enzymatic activity for severa! months. Papain and chymopapain showed higiler affinity for the substrates proteic than for papya proteinase. With the immobilized enzymes, papain showed biger affinity for the substrate than for the others proteases. Calorimetric studies showed that the enzymes chymopapain and papaya proteinase are thermically reversible and the denaturation of these enzymes obeys the two- state transition model. The existence of intermediate states for the denaturation of papain was confirmed. The value for the enthalpy of denaturation DHDESN of the proteases were determined as well as the ratio DHvanTHoff/DHDENS. In spite of the similar primary structure of the enzymes, the enthalpy variation of proteolisis is very different.
Arquivo (Texto Completo): vtls000093785.pdf ( tamanho: 8,17MB )

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