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BIBLIOTECA DO INSTITUTO DE QUÍMICA
UNICAMP

 
TESE DE DOUTORADO
 
Autor: Bariccatti, Reinaldo Aparecido
Título: Estudos Sobre a Estabilidade e Estrutura do DNA Através da Fotofísica de Corantes Intercalados
Ano: 1998
Orientador: Prof. Dr. Francisco B. T. Pessine
Departamento: Físico-Química
Palavras-chave: Transferência de energia, Alaranjado de Acridina, DNA
Resumo: O DNA é uma das biomoléculas mais fascinantes que existe, sendo responsável pela síntese do RNA e, consequentemente, por toda a informação genética. Atualmente o estudo desta macromolécula tem tido um avanço considerável devido ao projeto GENOMA, pesquisas nas áreas de eletro-analítica, fluorescência e em seus derivados reativos. Apesar da importância deste biopolímero são poucas as técnicas que podem fornecer informações referentes à sua estabilidade e conformação in vitro. Esta dificuldade reside, em parte, ao meio em que o DNA se encontra e às suas propriedades espectroscópicas, pois é uma molécula não fluorescente e suas bandas de absorção eletrônica são pouco sensíveis às alterações do solvente e à sua estrutura. Neste trabalho utilizou-se corantes intercaladores e fluorescentes como sondas que respondem às alterações no meio em que se encontram (DNA), havendo deslocamento da posição do máximo e da intensidade de absorção, variações no espectro e no tempo de vida de fiuorescência. Algumas destas alterações podem ser atribuídas às interações dipolares entre diferentes corantes que induzem um processo de transferência de energia, o qual pode ser empregado para estimar a distância entre essas sondas. As variáveis utilizadas neste estudo foram a presença de NaCI, GuCI, pressão e GuCl/pressão. A variação na concentração de NaCI provoca efeito diferente daquele observado para o GuCI. O primeiro altera o equilíbrio entre as espécies intercaladas e agregadas, enquanto com o segundo isso não ocorre. As características espectrais observadas na presença de GuCI são diferentes para a espécie livre em solução aquosa e intercalada, resultado de uma interação diferente entre o corante e o DNA, associada a uma desestruturação dessa macromolécula. A pressão não altera o equilíbrio entre as espécies intercaladas e livres na ausência de GuCI. Porém, em presença deste sal o aumento da pressão induz o retorno das características espectrais do corante intercalado, atribuídas ao retorno estrutural do sítio de intercalação. Quando se usa o par de corantes e se aumenta a pressão observa-se uma alteração na eficiência de transferência de energia associada à aproximação entre os corantes, quer o GuCI esteja presente ou não.
Abstract: In this work one used intercalated and fluorescent dyes to probe alterations in the DNA structure due to change in its environment, using absorption and emission spectroscopy. Some of these alterations can be attributed to dipolar interactions between different dyes that are responsible for energy transfer. This process can be used to obtain the distance among those probes. The variables used in this work were the presence of NaCI, guanidinium hydrochloride (GuCI), pressure and GuCl/pressure. The variation in the NaCI concentration causes a different effect from that observed for GuCI. NaCI alters the balance among the intercalated and aggregated species of the probes, while with the GuCI that doesn't happen. The spectral characteristics observed in the presence of GuCI are different for the free and intercalated species in aqueous solution, result of different interactions between the dyes and DNA, associated to a desestruturation of that macromolecule. The pressure doesn't change the balance among the intercalated and free species in the absence of GuCI. However, in presence of this salt the increase of the pressure induces the return of the spectral characteristics of the inserted probe in DNA, attributed to the structural recovery of the intercalation sites. When a pair of donor and acceptor of energy is used and one increase the pressure it is observed an alteration in the efficiency of energy transfer associated to a close proximity of the dyes.
Arquivo (Texto Completo): vtls000186809.pdf ( tamanho: 3,22 MB )

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