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BIBLIOTECA DO INSTITUTO DE QUÍMICA
UNICAMP

 
DISSERTAÇÃO DE MESTRADO
 
Autora: Guillo, Lidia Andreu
Título: Modificações no DNA por Acetona Triplete Gerada na Oxidação de 2-Metilpropanal em Presença de Peroxidase
Ano: 1982
Orientador: Prof. Dr. Nelson Eduardo Duran Caballero
Departamento: Físico-Química
Palavras-chave: --
Resumo: A incubação de 2-metilpropanal em tampão saturado com ar causa uma reação de oxidação iniciada pela formação de composto-I de peroxidase (HRP-I) e HRP-II para produzir acetona no estado excitado e ácido fórmico. O pH "ótimo" é ao redor de 7,0 e o kM a 40°C é 30 mM. Experimentos na presença e na ausência de íons metálicos sugerem que a peroxidase usa traços de H2O2 gerado durante a. incubação, para a formação de HRP-I. Aparentemente em HRP-I e HRP-II o sítio de ligação do substrato está ocupado por espécies fortemente ligadas às quais cianeto (10 mM) e azoteto (10 mM) não podem deslocar. A não linearidade de resposta para concentrações superiores a 2,2 mm de peroxidase e a razão kHAsO4/kHPO4 indicam uma eficiência de catálise relacionada com enolização de cetonas. As modificações estruturais do DNA depois do tratamento com acetona triplete gerada pelo sistema 2-metil propanal/peroxidase/O2 foram estudadas, usando-se térbio (III), acridina laranja e proflavina como sondas fluorescentes. Os resultados mostraram que os sítios do DNA contendo AT-GC e/ou GC-GC foram modificados e que regiões de fita simples foram formadas. O espectro de dicroísmo circular de acridina laranja na presença de DNA submetido ao sistema enzimático, corrobora esses efeitos. Provavelmente tais aIterações estariam relacionadas com a formação de adutos de pirimidina e/ou alterações na cadeia açúcar-fosfato.
Abstract: Incubation of 2-methylpropanal in air saturated buffer causes an oxidation reaction initiated by the formation of peroxidase compound-I (HRP-I) and then HRP-II to produce acetone in its excited state and formic acid. The optimun pH is around 7,0 and kM is 30 mM at 40°C. Experiments in the presence and absence of metal ions suggested that peroxidase uses the traces of H2O2 generated during the incubation for generation of HRP-I. Apparently in HRP-I and HRP-II the bindlng site is occupied by a tightly coordinated species in which cyanide (10 mM) and azide (10 mM) are unable to displace. Non linearity of response with peroxidase concentration over 2,2 mM and the ratio of kHAsO4/kHPO4 indicate that such catalytic involvement is conceivable for ketone enolization. Structural modifications of DNA after treatment with triplet acetone generated by 2-methylpropanal/peroxidase/O2 system were studied by using terbium (III), acridine orange and proflavine as fluorescent probes. These results showed that AT-GC and/or GC-GC sites in DNA were modified, and that single strand regions were formed. Circular dichroism (CD) of acridine orange in the presence of modified DNA corroborated these effects. Probably these alterations are related to pyrimidines adducts and/or modifications in the sugar-phosphate bond.
Arquivo (Texto Completo): vtls000048443.pdf ( tamanho: 4,81MB )

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