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BIBLIOTECA DO INSTITUTO DE QUÍMICA
UNICAMP

 
DISSERTAÇÃO DE MESTRADO
 
Autora: Verbi, Fabíola Manhas
Título: Mapeamento e Determinação de Espécies Químicas Ligadas às Proteínas de Calos de Citrus
Ano: 2003
Orientador: Prof. Dr. Marco Aurélio Zezzi Arruda
Departamento: Química Analítica
Palavras-chave: Proteínas, Metais, Eletroforese de gel, Fluorescência de raios-x
Resumo: Neste trabalho de dissertação foram mapeadas bandas de proteínas provenientes de calos embriogênicos in vitro (Citrus sinensis L. Osbeck). Estas bandas de proteínas foram, previamente, separadas utilizando eletroforese de gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio. Para efetuar este mapeamento foi empregada a micro fluorescência de raios-X com radiação síncrotron. Com os resultados obtidos foi verificada a presença de Fe nas bandas de proteínas com pesos moleculares de 81, 62, 55, 36, 32 e 14 kDa. Já, para a banda de 53 kDa foram obtidos resultados mais promissores. Além de Fe, o mapeamento indicou a presença de outras espécies químicas, tais como, Ca, Cu, K, e Zn. A quantificação de metais ligados às proteínas foi realizada empregando fluorescência de raios-X por reflexão total excitada com radiação síncrotron (determinação de Ca, Cu, Fe, K e Zn), bem como espectrometria de absorção atômica (Mg e comparação dos resultados para Ca) e espectrometria de emissão atômica com chama (Na). Nestas determinações foram empregadas bandas de proteínas mineralizadas e o Fe foi determinado nas proteínas de 81 e 14 kDa, (105 e 21,8 mg.g). Para as demais bandas (86 a 14 kDa) foram determinados Ca, Cu, K, Mg, Na e Zn nas faixas de concentrações de 42,4 a 283; 0,91 a 15,9; 2,47 a 96,8; 2,01 a 4,59; 29,3 a 305 e 3,39 a 29,7 mg.g, respectivamente.
Abstract: In the present work, protein bands from in vitro embriogenic callus (Citrus sinensis L. Osbeck) were mapped using micro synchrotron radiation X-ray fluorescence (mSR-XRF) after sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) separation. According to the analysis of the protein bands, it is possible to observe that both 81 and 14 kDa proteins present different Fe signal intensity at different mapped positions. The analysis of 53 kDa-protein, showed even more interesting results. Besides Fe, the mapping indicates the presence of Ca, Cu, K and Zn. Metal-binding protein quantification was done by synchrotron radiation total reflection X-ray fluorescence (Ca, Cu, Fe, K and Zn), flame atomic absorption spectrometry (Ca and Mg) and flame atomic emission spectrometry (Na). In the mineralised protein bands of 81 and 14-kDa-band only Fe was determined (105 and 21.8 mg g). For those protein bands (86-14 kDa), Ca, Cu, K, Mg, Na and Zn were determined in a wide concentration range, 42.4 to 283; 0,91 to 15.9; 2.47 to 96.8; 2.01 to 4.59; 29.3 to 305 and 3.39 to 29.7 mg g, respectively.
Arquivo (Texto Completo): vtls000314784.pdf ( tamanho: 612KB )

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