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BIBLIOTECA DO INSTITUTO DE QUÍMICA
UNICAMP

 
TESE DE DOUTORADO
 
Autora: Nunes, Suzana Pereira
Título: Osmocentrifugação e Ultrafiltração Centrífuga
Ano: 1985
Orientador: Prof. Dr. Fernando Galembeck
Departamento: Fisico-Química
Palavras-chave: -
Resumo: Este trabalho está dividido em 5 partes: i) Descrição da osmocentrifugação de acordo coma teoria dos processos irreversíveis, obtendo-se equações que relacionam o coeficiente de sedimentação aparente observado nesta técnica com aquele determinado na sedimentação normal, permitindo prever condições experimentais ótimas para diferentes sistemas; ii) Demonstração de que o equilíbrio de sedimentação difusão de alburnina bovina é alcançado em células de diálise de 7,5 cm de altura, centrifugadas a 1000 rpm após 136 horas, enquanto que o tempo necessário para alcançá-lo por sedimentação normal em condições análogas é de aproximadamente 2 anos, permitindo a determinação dos pesos moleculares (w ) e coeficientes de virial (BSD) de alburnina bovina w = (6,82 0,59) x10 g .mol ), ovalbumina (w = (4,26 0,61) x 10g.mol, BSD = 6 x 10 moI.g.cm ) e gamaglobulina (w = 1,59 0,07) x 10 g.mol , BSD = -7 x 10 mol.g.cm) em centrífugas e baixa velocidade; iii) Obtenção de gradientes de densidade autogerados de Percoll e Ficoll por osmocentrifugação em baixa velocidade de rotação (1000-3000 rpm),permitindo o fracionamento de partícuIas biológicas sem a utilização de ultracentrífugas; iv) Investigação da formação de complexos entre poliacrilamida catiônica e albumina(acima de seu ponto isoelétrico) como alternativa para o fracionamento de proteínas em solução,determinando-se a proporção ótima de alburnina/poliacrilamida (CALB/CPAM = 1,75) para a recuperação dos complexos; v) Demonstração de urna nova técnica de ultrafiltração em centrífuga, verificando-se que o próprio campo inercial pode ao mesmo tempo, agir como força motriz para a passagem do solvente através da membrana e minimizar o acúmulo de soluto na sua superfície, permitindo uma eficiente concentração de solu- tos macromoleculares e o fracionamento de proteínas de pesos moleculalares diferentes.
Abstract: This work is divided in 5 parts: i) Description of osmocentrifugation by the irreversible process thermodynamics formalism. This led to equations which predict when maximurn benefit may be obtained by using osmocentrifugation, as compared to standard centrifugation experiments ii) Demonstration of the fact that albumin solution equilibrium can be achieved in rnuch shorter times (136 h, in 7.5 crn-tall dialysis cells spun at 1000 rpm) than required for normal sedimentation (c a. 2 years), allowing the determination of molecular weights and virial coefficients of albumin (w = (6.82 0.59) x10 g.mol ), ovalbumin (w = (4.26 0.61) x 10 g.mol and BSD = 6 x 10 moI.g.cm ) and gamaglobulin (w = 1.59 0.07) x 10 g.mol and BSD = -7 x 10 mol. g.cm) in low speed centrifuges; iii) Obtainrnent of self-generated Percoll and Ficoll density gradients in low speed centrifuges (1000-3000 rpm), eliminating the need for ultracentrifuges in some biological particles fractionations; iv) Investigation of complex forrnation between cationic polyacrylamide and bovine albumin (above its isoelectric point) as an alternative for protein fractionation, determining the best albumin/polyacrylamide ratio (CALB/CPAM = 1.75) for cornplex recovery v) Demonstration of a new ultrafiltration technique in a centrifuge, verifying that the inertial field itself can simultaneously act as the driving force for the solvent flux across the rnembrane and for membrane depolarization. This technique proved very convenient for protein concentration and it rnade protein fractionation by size feasible, by ultra- filtration.
Arquivo (Texto Completo): vtls000052212.pdf ( tamanho: 6,32MB )

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