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BIBLIOTECA DO INSTITUTO DE QUÍMICA
UNICAMP

 
TESE DE DOUTORADO
 
Autor: Marzal, Percy Calvo
Título: Desenvolvimento de um Eletrodo Amperométrico para a Determinação de Glutationa em Eritrócitos
Ano: 2005
Orientador: Prof. Dr. Lauro Tatsuo Kubota
Coorientadora: Profa. Dra. Nelci Fenalti Höehr
Departamento: Química Analítica
Palavras-chave: Tetratiafulvaleno-Tetracianoquinodimetano, Eritrócitos, Eletrodo de pasta de carbono, Glutationa
Resumo: O presente trabalho refere-se ao desenvolvimento de um novo método para determinação de glutationa em eritrócitos, utilizando o método amperométrico. Para isto um eletrodo a base de pasta de carbono modificado com o complexo tetratiofulvaleno-tetracianoquinodimetano (TTF-TCNQ) foi desenvolvido, com o intuito de possibilitar a transferência de elétrons entre a glutationa e o eletrodo a baixos potenciais. O eletrodo modificado apresentou boas características em termos de seletividade, sensibilidade e tempo de resposta, facilitando sua operacionalidade para a detecção de glutationa. Com a modificação do eletrodo foi possível obter uma resposta bastante sensível para glutationa num potencial de 200 mV vs ECS. As melhores condições foram verificadas com 20% (m/m) de TTF-TCNQ incorporado na pasta de carbono e 0,5% de Nafion (m/v). As medidas foram realizadas em tampão fosfato pH 8,0 contendo KCl 0,1 mol L e EDTA 0,5 mmol L. Nessas condições, o eletrodo modificado apresentou um intervalo de resposta linear entre 5 a 340 mmol L de glutationa ajustado pela equação Dj = 0,7(±0,1) + 90,1(±0,4)[GSH] com um coeficiente de correlação de 0.9998 para n = 20, onde a densidade de corrente Dj é dada em mA cm e a concentração da GSH em mmol L. O tempo de resposta do eletrodo foi de 0,5 s. A aplicação do eletrodo permitiu a determinação direta de glutationa em eritrócitos após lisados sem uso de reagentes adicionais. O eletrodo desenvolvido apresentou um bom limite de detecção, alta seletividade e rapidez. Quando comparado com o método espectrofotométrico este apresentou boa correlação. Os testes de recuperação mostraram que o método amperométrico teve melhor desempenho (98 - 102%) que o método espectrofotométrico (90 - 92%).
Abstract: This work describes the development of a new amperometric method for glutathione determination in erythrocytes. For this task, a carbon paste electrode modified with tetrathiafulvalene-tetracyanoquinodimethane (TTF-TCNQ) complex was developed. The modified electrode improved the transference of electrons between the glutathione and electrode being very sensitive for glutathione at an applied potential of 200 mV vs SCE. The modified electrode presented good characteristics in terms of selectivity, sensitivity and fast response, for glutathione detection. The best performance was verified using 20% (m/m) of TTF-TCNQ incorporated in the carbon paste and 0.5% of Nafion (m/v). The measurements were performed in phosphate buffer at pH 8.0 containing 0.1 mol L KCl and 0.5 mmol L EDTA. In these conditions, the modified electrode presented a linear response range from 5 to 340 µmol L for glutathione adjusted by the equation Dj = 0.7(±0.1) + 90.1(±0.4)[GSH] with a correlation coefficient of 0.9998 for n=20, where the current density is given in µA cm and the concentration of GSH in mmol L. The response time of the electrode was 0.5 s. Applying this electrode was possible to determine glutathione in erythrocytes after lyses without additional reagents. And comparing the results obtained with the electrode and a spectrophotometric method a good correlation was observed. The recovery tests showed that the amperometric method was better (98 - 102%) that the spectrophotometric one (90 - 92%).
Arquivo (Texto Completo): vtls000374192.pdf ( tamanho: 1,40MB )

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